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水中葉綠素a的測(cè)定步驟

發(fā)布時(shí)間:2023-06-21 20:19:57   訪客:514

水中葉綠素濃度是浮游生物分布的指標(biāo),是衡量水體初級(jí)生產(chǎn)力和富營(yíng)養(yǎng)化作用的最基本的指標(biāo)。葉綠素分為葉綠素a和b,當(dāng)前研究更關(guān)注葉綠素a的濃度。浮游植物的大量生長(zhǎng)是水體富營(yíng)養(yǎng)化的主要現(xiàn)象,其中葉綠素a是所有浮游植物門類都含有的葉綠素類型,不僅作為水體營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)劃分的重要指標(biāo),而且可用于表征浮游植物的現(xiàn)存量。因此,葉綠素a在水體富營(yíng)養(yǎng)狀況評(píng)價(jià)中起關(guān)鍵性作用。

葉綠素a本身對(duì)環(huán)境沒(méi)有危害,但它是估算浮游植物生物量的重要指標(biāo),可以通過(guò)測(cè)定水中浮游植物葉綠素a的含量,掌握水體的初級(jí)生產(chǎn)力情況和富營(yíng)養(yǎng)化水平,在環(huán)境監(jiān)測(cè)中,葉綠素a含量是評(píng)價(jià)水體富營(yíng)養(yǎng)化的指標(biāo)之一。國(guó)際上,經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織(OECD)規(guī)定了關(guān)于評(píng)定湖泊營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)的葉綠素a劃分標(biāo)準(zhǔn)。我國(guó)原地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(GHZB1-1999)中規(guī)定了葉綠素a標(biāo)準(zhǔn)值,但是現(xiàn)行有效的地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(GB3838-2002)沒(méi)有葉綠素a的標(biāo)準(zhǔn)值。

水中葉綠素a的測(cè)定步驟具體是什么呢?

(1)提取試劑

除熱乙醇法,國(guó)內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)方法均采用90%丙酮作為提取試劑。EPA446.0指出,90%丙酮溶液可以有效提取大部分藻類細(xì)胞中的葉綠素a,而且不產(chǎn)生其他衍生物。丙酮是國(guó)際上較為公認(rèn)的提取葉綠素的試劑

(2)濾膜

除《水和廢水檢測(cè)分析方法(第四版)》采用乙酸纖維濾膜外,均采用玻璃纖維濾膜。

(3)樣品保存方法

樣品的保存條件各種方法略有不同,但水樣采集后均保證4℃冷藏保存,樣品濾膜可冷凍保存。而且葉綠素a測(cè)定樣品濾膜冷凍后再研磨,可提高提取效率。在《浮游植物中葉綠素a提取方法的比較與改進(jìn)》的研究結(jié)果。如采樣后不立刻測(cè)定,-18℃下冰凍,再于室溫條件下融解,利用細(xì)胞內(nèi)冰粒的形成和細(xì)胞液濃度的增高引起溶漲,使胞壁結(jié)構(gòu)破碎引起葉綠素溶出。

(4)是否研磨及研磨后是否需要浸泡

雖然研磨的方法較為費(fèi)力,但是該方法操作簡(jiǎn)單,儀器設(shè)備要求低,常溫操作不會(huì)對(duì)葉綠素a造成破壞,細(xì)胞破碎完全,對(duì)葉綠素的提取速度快,效率高,并在環(huán)境監(jiān)測(cè)系統(tǒng)廣泛應(yīng)用,考慮到方法的經(jīng)典性和數(shù)據(jù)的可沿用性,新的技術(shù)線路中關(guān)于對(duì)葉綠素a的提取步驟沿用《水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法(第四版)》中的研磨方法,研磨提取葉綠素a,主要通過(guò)機(jī)械作用破壞藻類的細(xì)胞壁和葉綠體使葉綠素a溶解于丙酮,并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)。

(5)計(jì)算公式及波長(zhǎng)

關(guān)于計(jì)算方法,主要有三色法和單色法,三色法主要考慮了葉綠素b和葉綠素c對(duì)測(cè)定的干擾,測(cè)定的是表觀葉綠素a的含量(包括葉綠素a與脫鎂葉綠素a之和),單色法考慮脫鎂葉綠素a的干擾。從方法的簡(jiǎn)便性來(lái)說(shuō),三色法操作簡(jiǎn)單,產(chǎn)生誤差幾率小,耗時(shí)比單色法短;目前《水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法(第四版)》中測(cè)定葉綠素a的方法在地表水環(huán)境監(jiān)測(cè)中應(yīng)用最為廣泛,該方法采用丙酮研磨提取葉綠素a,用三色法計(jì)算葉綠素a的濃度。


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